告別(bie)SDS-PAGE，Turbo CE-SDS讓(rang)蛋白(bai)分析更(geng)加快(kuai)、準(zhun)、穩(wen)！

在(zai)生(sheng)物(wu)制(zhi)藥研(yan)發(fa)與(yu)質(zhi)控領(ling)域，蛋白(bai)質(zhi)的(de)精(jing)確分(fen)析是確保(bao)藥物(wu)安(an)全性和(he)有效性(xing)的(de)關鍵(jian)步驟。傳統(tong) SDS-PAGE 凝膠(jiao)電泳雖廣(guang)泛應(ying)用(yong)，但其耗時費力、重(zhong)現性(xing)差(cha)等(deng)問(wen)題(ti)始終(zhong)困(kun)擾(rao)著研(yan)發人(ren)員。如今，毛細(xi)管(guan)電泳-十(shi)二(er)烷(wan)基硫(liu)酸(suan)鈉（CE-SDS）技術(shu)憑借(jie)高(gao)效、精(jing)準、自(zi)動化(hua)的(de)優勢，正(zheng)在(zai)成為(wei)新壹(yi)代(dai)蛋白(bai)質(zhi)分析的(de) “金標準"。

本(ben)文(wen)將(jiang)通(tong)過分析單克(ke)隆(long)抗(kang)體、病毒(du)衣(yi)殼(ke)蛋白(bai)，對比Maurice™ 系(xi)統(tong) Turbo CE-SDS 與傳統(tong) SDS-PAGE 兩種(zhong)方法(fa)的(de)數(shu)據質(zhi)量(liang)、靈(ling)敏(min)度及(ji)重(zhong)現性(xing)，展(zhan)示(shi) Turbo CE-SDS 如何實(shi)現蛋白(bai)分析的(de)“智能升級(ji)"！

01. 效率革(ge)新：Turbo CE-SDS讓(rang)蛋白(bai)分析實(shi)現高(gao)效自(zi)動化(hua)

傳統(tong)SDS-PAGE需手(shou)動制(zhi)膠、染色、脫色，耗時長(chang)達數(shu)小(xiao)時，且(qie)產(chan)生(sheng)大量(liang)有(you)害(hai)廢(fei)液(ye)（圖(tu)1）。Maurice™ Turbo CE-SDS 通(tong)過全自動工作流(liu)程(cheng)，僅需65分(fen)鐘(zhong)即可(ke)完成12個樣本(ben)分析，且(qie)廢(fei)液量(liang)大大減少(shao)，大幅提(ti)升實(shi)驗(yan)室(shi)效率與(yu)環保性(xing)。

圖(tu)1 SDS-PAGE與(yu)CE-SDS工作流(liu)對比

02. 高(gao)靈(ling)敏(min)度與(yu)精(jing)準定(ding)：CE-SDS精(jing)準解(jie)析蛋白(bai)雜質(zhi)與修(xiu)飾

Maurice™ Turbo CE-SDS 的(de)分辨(bian)率遠(yuan)超(chao)凝(ning)膠(jiao)電(dian)泳，能夠檢測(ce)到 SDS-PAGE 無(wu)法(fa)分(fen)辨(bian)的(de)微(wei)弱峰(feng)和次要修飾，提供(gong)更(geng)高(gao)的(de)分離(li)和(he)定量(liang)精(jing)度。

以(yi)單抗(kang)藥物(wu) Belimumab 為(wei)例(li)，圖(tu) 2A 和(he) 2B 分別(bie)展示(shi)了Belimumab使(shi)用(yong) Maurice™ Turbo CE-SDS 方法(fa)在(zai)非(fei)還原和還原條件下(xia)生(sheng)成的(de)電泳圖(tu)譜(pu)，所顯示(shi)的(de)峰對應(ying)於凝膠(jiao)電(dian)泳結(jie)果中的(de)各(ge)種條(tiao)帶。在(zai)非(fei)還原條件下(xia)，CE-SDS不僅清晰(xi)顯示(shi)主峰，還檢測(ce)到3個(ge)次要峰Peak1-Peak3（圖(tu)2A），而(er) SDS-PAGE 凝膠檢測(ce)不到（圖(tu)2C）。在(zai)還原條件下(xia)CE-SDS生(sheng)成的(de)電泳圖(tu)顯示(shi)出(chu)分辨(bian)良(liang)好的(de)輕鏈（LC）和(he)重(zhong)鏈(lian)（HC），以(yi)及(ji)其(qi)他小(xiao)峰(feng)。這(zhe)些(xie)微(wei)量(liang)雜質(zhi)可(ke)能影響(xiang)藥物(wu)穩(wen)定(ding)性(xing)與(yu)療(liao)效，CE-SDS 為(wei)生(sheng)物(wu)類似藥開(kai)發提(ti)供(gong)了(le)關鍵(jian)的(de)質(zhi)控依(yi)據(ju)。

圖(tu)2 非(fei)還原與還原條件下(xia)單抗(kang) Belimumab 的(de)CE-SDS 和 SDS-PAGE 分析結(jie)果

Maurice 的(de) CE-SDS 還可(ke)用(yong)於 AAV 病(bing)毒(du)衣(yi)殼(ke)蛋白(bai)的(de)定量(liang)分(fen)析。如圖(tu)3所(suo)示(shi)，CE-SDS 能夠清晰(xi)區分 AAV8 與 AAV9 的(de) VP1/VP2/VP3 組成，並(bing)檢測(ce)到低(di)分(fen)子(zi)量(liang)（LMW）雜質(zhi)與修(xiu)飾產(chan)物(wu)（如VP3a），為(wei)基因治(zhi)療(liao)產(chan)品的(de)質(zhi)量(liang)控(kong)制(zhi)提供(gong)全(quan)面支(zhi)持(chi)。

圖(tu)3  AAV8 與(yu) AAV9 的(de) CE-SDS 電泳圖(tu)

03. 零學(xue)習(xi)成本(ben)：Compass 軟件(jian)讓(rang)數(shu)據解讀無(wu)縫(feng)銜接

Compass for iCE 軟(ruan)件(jian)的(de) Lane View 功能可(ke)以(yi)將(jiang)實(shi)驗(yan)得到的(de)電泳圖(tu)譜(pu)以(yi)類似傳統(tong)凝膠(jiao)圖(tu)的(de)形式(shi)展(zhan)示(shi)出(chu)來，無(wu)縫(feng)銜接傳統(tong)數(shu)據解讀習(xi)慣，使(shi)得數(shu)據分析更(geng)加直(zhi)觀(guan)易(yi)懂，且(qie)與傳統(tong)電泳結(jie)果直(zhi)接(jie)對(dui)標。

圖(tu)4 AAV 樣品的(de) Compass for iC 產(chan)生(sheng)的(de)凝膠圖(tu)（左）與(yu)SDS-PAGE凝膠(jiao)（右(you)）

04. 重(zhong)現性(xing)：CE-SDS突(tu)破傳統(tong)電泳的(de)批次變異(yi)瓶(ping)頸

Turbo CE-SDS 通過定量(liang)峰(feng)積(ji)分(fen)取(qu)代(dai)定性條帶強(qiang)度(du)評(ping)估(gu)，顯著降低了(le)實(shi)驗(yan)間(jian)的(de)變異(yi)性(xing)。

通(tong)過對比 Belimumab 在(zai) Maurice™ Turbo CE-SDS 連續(xu) 34 次進(jin)樣與(yu) SDS-PAGE 12 條泳道的(de)數(shu)據，發現非(fei)還原條件下(xia)，CE-SDS 的(de)總峰(feng)面(mian)積(ji)相(xiang)對(dui)標準偏差(cha)（%RSD）僅(jin)為(wei)1.04%，而(er) SDS-PAGE 高(gao)達23.56%（圖(tu)5）。還原條件下(xia)，Turbo CE-SDS 的(de) LC 和 HC 的(de)峰面積(ji)百(bai)分(fen)比(bi)的(de)%RSD也遠(yuan)低(di)於(yu) SDS-PAG（圖(tu)6），表明(ming) CE-SDS 具(ju)有(you)更(geng)高(gao)的(de)定量(liang)重(zhong)現性(xing)。同(tong)樣在(zai) AAV8 與(yu) AAV9 的(de)樣本(ben)分析中也證(zheng)明(ming)了這(zhe)壹(yi)點。

圖(tu)5 Belimumab 的(de) Maurice Turbo CE-SDS 和 SDS-PAGE 總峰(feng)面(mian)積(ji)重(zhong)現性(xing)的(de)比較（非(fei)還原條件下(xia)）

圖(tu)6 單抗(kang) Belimumab 的(de) Maurice Turbo CE-SDS 和 SDS-PAGE 的(de)峰面積(ji)百(bai)分(fen)比(bi)重(zhong)現性(xing)的(de)比較（還原條件下(xia)）

05. 還在(zai)固守 SDS-PAGE？—— 技術(shu)革新正(zheng)當(dang)時

將(jiang)Maurice™ Turbo CE-SDS與(yu)SDS-PAGE 同步(bu)用(yong)於單克(ke)隆(long)抗(kang)體和 AAV 樣本(ben)分析，數(shu)據已(yi)經證(zheng)實(shi) CE-SDS 以(yi)更(geng)快速(su)度(du)、更(geng)高(gao)精(jing)度和(he)更(geng)強(qiang)重(zhong)現性(xing)實(shi)現蛋白(bai)分析新突(tu)破(po)！

   ▍關於(yu)ProteinSimple：

   ProteinSimple 是美(mei)國(guo)納斯達克上(shang)市公司(si)Bio-Techne集(ji)團(tuan) (NASDAQ:TECH) 旗(qi)下(xia)的(de)蛋白(bai)質(zhi)分析品牌。“使(shi)蛋白(bai)質(zhi)分析更(geng)簡(jian)單"是ProteinSimple 壹直(zhi)以(yi)來(lai)的(de)願(yuan)景。ProteinSimple長(chang)期(qi)致力於(yu)研發和(he)生(sheng)產(chan)更(geng)精(jing)準、更(geng)快速(su)、更(geng)靈敏(min)的(de)創新性(xing)蛋白(bai)質(zhi)分析工(gong)具(ju)，包(bao)括(kuo)蛋白(bai)質(zhi)電荷表征、蛋白(bai)質(zhi)純(chun)度分析、蛋白(bai)質(zhi)翻(fan)譯(yi)後(hou)修飾定量(liang)檢測(ce)、蛋白(bai)質(zhi)免疫(yi)檢測(ce)技術(shu)如數(shu)字Western Blot和高(gao)靈(ling)敏(min)微(wei)流控(kong)多(duo)重(zhong)ELISA，以(yi)幫(bang)助生(sheng)物(wu)制(zhi)藥、細(xi)胞(bao)與基因治(zhi)療(liao)、生(sheng)物(wu)醫(yi)學(xue)和生(sheng)命科學(xue)等(deng)領(ling)域科學(xue)家解(jie)決(jue)蛋白(bai)質(zhi)分析問(wen)題(ti)。作為(wei)ProteinSimple華東大區 (江浙滬(hu)皖魯(lu)) 的(de)授(shou)權(quan)代(dai)理(li)商，上(shang)海(hai)昊擴(kuo)將(jiang)為(wei)大家提(ti)供(gong)ProteinSimple旗(qi)下(xia)儀(yi)器設(she)備(bei)。

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   上(shang)海昊擴(kuo)科學(xue)器材有(you)限(xian)公司(si)成立(li)於(yu)2019年(nian)，總部(bu)位(wei)於上(shang)海，是壹家(jia)實(shi)驗(yan)室(shi)設備(bei)/耗材及(ji)分(fen)析儀(yi)器的(de)專業服務商。公司(si)致力於(yu)為(wei)生(sheng)物(wu)、醫(yi)藥、物(wu)性(xing)檢測(ce)、化(hua)工(gong)分析、食(shi)品、工業生(sheng)產(chan)等(deng)相(xiang)關領(ling)域客戶(hu)提(ti)供(gong)國(guo)內外(wai)高(gao)科技專業設備(bei)以(yi)及(ji)技術(shu)咨(zi)詢(xun)服務。