MaxCyte電(dian)轉(zhuan)：開啟角化(hua)細(xi)胞工(gong)程化(hua)之門，重(zhong)塑皮(pi)膚治療(liao)未(wei)來(lai)

(2) 成年(nian)角化(hua)細(xi)胞的(de)體外(wai)培養和(he)擴增容(rong)易，適(shi)合自體和(he)同(tong)種(zhong)異(yi)體細(xi)胞治(zhi)療(liao)產(chan)品(pin)。

(3) 之前限(xian)制(zhi)：成年(nian)角化(hua)細(xi)胞缺(que)乏高(gao)效的轉染(ran)方法(fa)。

(4) 本(ben)研究目標：開發符合GMP標準的(de)、可(ke)擴展的(de)細(xi)胞工(gong)程流(liu)程，使用(yong)MaxCyte^®電(dian)穿孔技術(shu)轉染來(lai)自(zi)四(si)個不(bu)同(tong)解(jie)剖(pou)位置(zhi)的新(xin)生兒(er)和(he)成年(nian)原代(dai)角化(hua)細(xi)胞。

實(shi)驗(yan)流程(cheng)

主要(yao)發現(xian)

• 使用(yong)MaxCyte技術(shu)，高效地將mRNA或CRISPR-Cas9核(he)糖(tang)核(he)蛋(dan)白(bai) (RNPs) 傳(chuan)遞給(gei)原代(dai)角化(hua)細(xi)胞，不(bu)損(sun)害(hai)細(xi)胞活(huo)性、形(xing)態或生長能(neng)力(li)。

上(shang)圖(tu)：使用(yong)MaxCyte ATx電(dian)轉儀(yi)對(dui)原(yuan)代(dai)包(bao)皮角(jiao)化(hua)細(xi)胞進(jin)行mRNA-GFP或ATTO550標記(ji)的CRISPR RNPs電穿孔後(hou)的流式(shi)細(xi)胞儀(yi)分析(xi)結(jie)果(guo)，顯示了(le)高(gao)效的(de)轉染效率(lv)。

上圖(tu)：使用(yong)CCR5靶(ba)向CRISPR RNP電穿(chuan)孔後(hou)的原代(dai)角化(hua)細(xi)胞的(de)生長曲線，電轉(zhuan)後(hou)細(xi)胞增(zeng)殖(zhi)幾(ji)乎不(bu)受(shou)影響。

上(shang)圖(tu)：使用(yong)MaxCyte ATx儀(yi)器對(dui)來(lai)自(zi)不(bu)同(tong)解(jie)剖(pou)位置(zhi)的原代皮膚成纖(xian)維細(xi)胞、扁(bian)桃(tao)體來(lai)源(yuan)的(de)口腔(qiang)角化(hua)細(xi)胞和(he)鼓膜(mo) (中(zhong)耳) 角化(hua)細(xi)胞進(jin)行ATTO 550標記(ji)的CRISPR RNPs電穿孔後(hou)的流式(shi)細(xi)胞儀(yi)分析(xi)結(jie)果(guo)，顯示了(le)高(gao)效的(de)轉染效率(lv)。

• 單次(ci)電(dian)穿(chuan)孔可(ke)實(shi)現(xian)高(gao)效的(de)多(duo)重(zhong)基(ji)因(yin)編輯(ji)，簡化(hua)了(le)流(liu)程。

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