安捷倫(lun)RTCA實時(shi)無標(biao)記(ji)細胞分析系統

產品(pin)簡(jian)介(jie)

  安捷倫(lun)RTCA實時(shi)無標(biao)記(ji)細胞分析系統是(shi)壹(yi)種(zhong)新(xin)型(xing)的細胞檢測(ce)系統，反映(ying)細胞生(sheng)物(wu)學(xue)狀(zhuang)態(tai)。xCELLigence®實時(shi)細胞分析（RTCA）MP儀(yi)器使(shi)用(yong)無(wu)創電(dian)阻(zu)抗(kang)監測(ce)，以(yi)實時(shi)無標(biao)記(ji)的方(fang)式量化細胞增殖，細胞形態變(bian)化(hua)和附著質(zhi)量(liang)。 MP與其他xCELLigence®儀(yi)器不(bu)同(tong)，它(ta)可(ke)以(yi)容(rong)納6個96孔(kong)實時(shi)微電(dian)子檢測(ce)板（E-Plate®96）。這六(liu)個板可(ke)以(yi)同(tong)時(shi)控制和(he)監控(kong)，但(dan)彼此獨立，可(ke)為(wei)多(duo)個(ge)用(yong)戶(hu)提供(gong)大的通量(liang)。將MP儀(yi)器置(zhi)於標(biao)準的CO2細胞培(pei)養箱(xiang)中(zhong)，並通(tong)過電(dian)線(xian)與(yu)分析和(he)控(kong)制單(dan)元(yuan)接(jie)觸，並將(jiang)其放置(zhi)在(zai)培(pei)養箱(xiang)外(wai)。友好(hao)的用(yong)戶(hu)軟件(jian)允許(xu)對(dui)儀(yi)器進(jin)行(xing)實時(shi)控制和(he)監控(kong)，並(bing)包括(kuo)實時(shi)數據(ju)進(jin)行(xing)顯(xian)示(shi)和(he)分析。 消(xiao)除(chu)了(le)傳(chuan)統終點法的基(ji)於細胞的測定(ding)的時(shi)間和(he)勞(lao)動(dong)密集型(xing)步(bu)驟(zhou)，xCELLigence RTCA MP的實時(shi)細胞分析大(da)大(da)提高了(le)效率和總(zong)體(ti)通量(liang)。通(tong)過(guo)消除對(dui)標記(ji)/染料(liao)的需(xu)要，獲得的大的相關(guan)數(shu)據。

細胞阻(zu)抗(kang)說(shuo)明(ming)

  在細胞生(sheng)物(wu)化學(xue)測(ce)定(ding)和全身生(sheng)物(wu)體(ti)內實驗(yan)之間(jian)定(ding)位(wei)，基(ji)於細胞的測定(ding)是(shi)基(ji)礎和應(ying)用(yong)生(sheng)物(wu)學(xue)研(yan)究*的工具(ju)。然而(er)，許多(duo)基(ji)於細胞的測定(ding)法的作用(yong)通(tong)過以下方(fang)式被減(jian)少(shao)：（1）需(xu)要使(shi)用(yong)標(biao)記；（2）與連(lian)續(xu)監測(ce)不(bu)相容(rong)（即(ji)僅產(chan)生(sheng)終點數據(ju)）；（3）與正(zheng)交(jiao)試(shi)驗(yan)不(bu)相容(rong)；（ 4）無法(fa)提供(gong)客觀/定量(liang)的讀數(shu)。然而(er)，這些(xie)缺點都是(shi)通(tong)過(guo)非侵(qin)入性的，無標(biao)記的和實時(shi)的細胞阻(zu)抗(kang)測定來克服的。 細胞阻(zu)抗(kang)測定的功能(neng)單(dan)元(yuan)是(shi)融合到(dao)微量(liang)滴(di)定(ding)板孔(kong)的底部表面(mian)的壹組(zu)金(jin)微電(dian)極(ji)（圖(tu)1）。當浸(jin)沒(mei)在(zai)導電(dian)溶液（如(ru)緩(huan)沖液或(huo)標準(zhun)組(zu)織(zhi)培(pei)養基(ji)）中(zhong)時(shi)，在這些(xie)電(dian)極(ji)上(shang)施加電(dian)位會(hui)使(shi)電(dian)子離開負(fu)極(ji)，通過本體(ti)溶液(ye)，然後(hou)沈(chen)積到(dao)正(zheng)以(yi)完成電(dian)路。因為(wei)這種(zhong)現象(xiang)取(qu)決於電(dian)極(ji)與本體(ti)溶液(ye)相互作用(yong)，所以在電(dian)極(ji) - 溶液(ye)界(jie)面(mian)處的粘附(fu)細胞的存在(zai)阻(zu)礙了電(dian)子流動(dong)。該(gai)阻(zu)抗(kang)的大小取決於細胞的數量(liang)，細胞的大小和形狀以(yi)及細胞 - 基(ji)底附著質(zhi)量(liang)。重要的是(shi)，金(jin)微電(dian)極(ji)表面(mian)和施加的電(dian)位（22 mV）都不(bu)影(ying)響細胞的健(jian)康或行為。

  圖(tu)1，細胞阻(zu)抗(kang)裝置(zhi)概(gai)述在(zai)單(dan)元(yuan)格(ge)添(tian)加之(zhi)前和之(zhi)後(hou)顯(xian)示(shi)單(dan)個(ge)孔(kong)的側視圖(tu)。電(dian)極(ji)和電(dian)池都不(bu)被(bei)拉伸（為了(le)清(qing)晰起見(jian)，它(ta)們(men)被放(fang)大(da)）。在不(bu)存(cun)在電(dian)池的情況下，電(dian)流自(zi)由(you)流(liu)動(dong)通過培(pei)養基(ji)，完成電(dian)極(ji)之間的電(dian)路。由於細胞在(zai)電(dian)極(ji)上(shang)粘附(fu)並增殖，電(dian)流流動(dong)受(shou)阻(zu)，提供(gong)了細胞數(shu)量，細胞大(da)小/形態以(yi)及細胞 - 基(ji)質(zhi)附(fu)著質(zhi)量(liang)的非常靈敏的讀數(shu)。

阻(zu)抗(kang)電(dian)極(ji):

   ACEA的實時(shi)微電(dian)子檢測(ce)板—E-Plate板每孔(kong)中(zhong)的金(jin)微電(dian)極(ji)生(sheng)物(wu)傳感(gan)器覆(fu)蓋(gai)70-80％的表面(mian)積（取(qu)決(jue)於是(shi)否(fou)存在(zai)視野區域）。而(er)不(bu)是(shi)圖(tu)1所示(shi)的簡化(hua)的電(dian)極(ji)對，每個(ge)孔(kong)中(zhong)的電(dian)極(ji)被連接(jie)成形成交錯陣列的“線(xian)”（圖(tu)2）。這種(zhong)布置(zhi)可(ke)以(yi)同(tong)時(shi)監測(ce)細胞群(qun)體(ti)，從而(er)提供(gong)精確(que)的靈敏(min)度：附(fu)著於板的細胞數(shu)，細胞的大小/形態以(yi)及細胞 - 基(ji)質(zhi)附(fu)著質(zhi)量(liang)。

  圖(tu)2，ACEA實時(shi)微電(dian)子檢測(ce)板— E-Plate板上(shang)的阻(zu)抗(kang)電(dian)極(ji)。 （A）實時(shi)微電(dian)子檢測(ce)板的每個(ge)孔(kong)中(zhong)使(shi)用(yong)的叉(cha)指電(dian)極(ji)的簡化(hua)示(shi)意圖(tu)。電(dian)極(ji)沒有(you)按(an)比例繪制（僅顯(xian)示(shi)壹(yi)些(xie)電(dian)極(ji)，為了清(qing)晰起見(jian)，它(ta)們(men)已被(bei)放(fang)大）。雖(sui)然細胞也(ye)可(ke)以(yi)在(zai)金(jin)電(dian)極(ji)表面(mian)上(shang)可(ke)視(shi)化(hua)，但(dan)在中(zhong)間的無電(dian)極(ji)區域有(you)助(zhu)於顯(xian)微成像（亮(liang)場(chang)，熒光(guang)等）。（B）16孔(kong)E-Plate板中(zhong)單(dan)井(jing)的照(zhao)片(pian)。（C）放大(da)陰(yin)影(ying)電(dian)極(ji)和未染色(se)人體(ti)細胞的明(ming)場(chang)圖(tu)像(xiang)。（D）復合顯微鏡(jing)中(zhong)觀察到(dao)的金(jin)電(dian)極(ji)和結晶(jing)紫染色(se)的人細胞。

實時(shi)阻(zu)力跟蹤(zong)說(shuo)明(ming)

  使(shi)用(yong)稱(cheng)為細胞指(zhi)數（CI）的無單(dan)位(wei)參(can)數(shu)報(bao)告了(le)由(you)貼壁細胞引起的電(dian)子流的阻(zu)抗(kang)，其中(zhong)CI =(時(shi)間點n阻(zu)抗(kang)-不(bu)存(cun)在細胞時(shi)阻(zu)抗(kang)）/標稱(cheng)阻(zu)抗(kang)值。圖(tu)3提供(gong)了在建立(li)和(he)運行雕(diao)亡實驗(yan)過程(cheng)中(zhong)實時(shi)阻(zu)抗(kang)曲線(xian)的通用(yong)示(shi)例。在細胞添(tian)加到(dao)孔(kong)中(zhong)的頭幾個小時(shi)之後(hou)，阻(zu)抗(kang)快速增加。這是(shi)由(you)於懸(xuan)浮(fu)液(ye)中(zhong)的細胞脫落(luo)，沈(chen)積在(zai)電(dian)極(ji)上(shang)並形成局(ju)部粘連(lian)。如(ru)果(guo)添(tian)加的細胞的初始(shi)數量低(di)，並(bing)且在(zai)井(jing)底(di)上(shang)存在(zai)空(kong)的空(kong)間(jian)，則(ze)細胞將(jiang)增殖，導致CI逐漸(jian)但(dan)穩(wen)定(ding)增加。當(dang)細胞達(da)到(dao)匯合CI值時(shi)，反映(ying)了大容(rong)量(liang)介(jie)質(zhi)可(ke)接(jie)近的電(dian)極(ji)表面(mian)積不(bu)再改(gai)變(bian)的事實。此時(shi)加入細胞雕(diao)亡誘導劑(ji)導致CI降低至(zhi)零(ling)。雖(sui)然這個(ge)通用(yong)實例涉及細胞融合時(shi)的藥物(wu)添(tian)加，基(ji)於阻(zu)抗(kang)的測定(ding)是(shi)非常靈活的，並且還可(ke)以(yi)評估初(chu)始(shi)細胞粘附(fu)到(dao)電(dian)極(ji)的速率和程(cheng)度，或(huo)細胞增殖的速率和程(cheng)度。

  圖(tu)3.用(yong)於建立(li)和(he)運行雕(diao)亡測定的通用(yong)實時(shi)阻(zu)抗(kang)曲線(xian)。 在文(wen)中(zhong)解釋了阻(zu)抗(kang)曲線(xian)的每個(ge)階段(duan)及其產生(sheng)的蜂(feng)窩(wo)行為(wei)。

  上(shang)述通(tong)用(yong)示(shi)例，圖(tu)4顯示(shi)了(le)使(shi)用(yong)ACEA的xCELLigence實時(shi)單(dan)元(yuan)分析（RTCA）儀(yi)器中(zhong)的E-Plate板中(zhong)采(cai)集的實際實時(shi)阻(zu)抗(kang)數據。 圖(tu)4A顯示(shi)將(jiang)A549細胞添(tian)加到(dao)E-Plate板後(hou)的頭兩(liang)個小時(shi)的阻(zu)抗(kang)曲線(xian)，其中(zhong)孔(kong)預先(xian)用(yong)不(bu)同(tong)濃度的膠原(yuan)IV包被(bei)。 雖(sui)然圖(tu)4B顯示(shi)了(le)在(zai)將(jiang)HeLa細胞暴(bao)露於GPCR激動(dong)劑(ji)多巴(ba)胺的初幾分鐘內(nei)發(fa)生(sheng)的細胞指(zhi)數的變(bian)化(hua)，圖(tu)4C評估了(le)在(zai)20小時(shi)內NK細胞介(jie)導的癌細胞的細胞溶(rong)解。 圖(tu)4D突(tu)出(chu)顯示(shi)根(gen)據(ju)藥(yao)物(wu)的作用(yong)機(ji)制可(ke)能(neng)在細胞指(zhi)數中(zhong)發(fa)生(sheng)的變(bian)化(hua)。

  圖(tu)4.使(shi)用(yong)E-Plate和xCELLigence RTCA儀(yi)器獲(huo)得(de)的實時(shi)阻(zu)抗(kang)曲線(xian)的示(shi)例。 （A）實時(shi)監測(ce)已(yi)經(jing)預先塗覆不(bu)同(tong)濃度膠(jiao)原IV的E-Plate孔(kong)的A549細胞粘附(fu)。請(qing)註意阻(zu)抗(kang)值（細胞指(zhi)數）與(yu)顯(xian)微鏡(jing)中(zhong)可(ke)見(jian)的貼壁細胞數(shu)之間(jian)的相關(guan)性(xing)。 （B）暴露(lu)於不(bu)同(tong)濃度GPCR激動(dong)劑(ji)多巴(ba)胺的HeLa細胞的實時(shi)阻(zu)抗(kang)曲線(xian)。黑(hei)色(se)箭頭表示(shi)多(duo)巴(ba)胺(an)加入的時(shi)間。 （C）用(yong)於NK細胞介(jie)導的MCF7乳(ru)腺癌(ai)細胞溶(rong)解的實時(shi)阻(zu)抗(kang)曲線(xian)。 （D）暴露(lu)於藥(yao)物(wu)的A549細胞的實時(shi)阻(zu)抗(kang)曲線(xian)顯(xian)示(shi)各種作(zuo)用(yong)機(ji)制。

與細胞相關(guan)的抵(di)抗(kang)力

    安捷倫(lun)RTCA實時(shi)無標(biao)記(ji)細胞分析系統RTCA提供(gong)細胞數(shu)量，增殖率，細胞大(da)小/形狀和(he)細胞 - 底物(wu)附著質(zhi)量(liang)的定量(liang)讀數。由(you)於這些(xie)物(wu)理性(xing)質(zhi)是(shi)數(shu)千種(zhong)不(bu)同(tong)基(ji)因/蛋白質(zhi)的產物(wu)，因此RTCA可(ke)以(yi)為(wei)細胞健(jian)康和行為提供(gong)非常廣泛的視野。在(zai)xCELLigence儀(yi)器上(shang)已經(jing)成功地(di)分析了(le)從內(nei)皮屏障功能(neng)和趨化(hua)性(xing)到(dao)絲(si)狀(zhuang)偽(wei)足動(dong)力學(xue)和(he)免(mian)疫(yi)細胞介(jie)導的細胞溶(rong)解的壹切。盡管它(ta)們(men)的廣泛性，xCELLigence測定(ding)仍然能(neng)夠(gou)詢問非常具體(ti)的生(sheng)化(hua)和(he)細胞現(xian)象(xiang)。適當(dang)使(shi)用(yong)對(dui)照(zhao)和/或正(zheng)交(jiao)技術(shu)使(shi)得(de)可(ke)以(yi)將(jiang)阻(zu)抗(kang)跡線(xian)的特征與特定的細胞/分子現(xian)象(xiang)相關(guan)聯(lian)。要了解(jie)如(ru)何(he)做(zuo)到(dao)這壹(yi)點，並且看(kan)到(dao)xCELLigence RTCA技術(shu)的敏感(gan)性和(he)多(duo)功能(neng)性，請(qing)仔細閱讀這裏(li)突(tu)出(chu)顯示(shi)的許多(duo)具體(ti)應(ying)用(yong)。