蛋白(bai)質是生命體(ti)系中的(de)基(ji)本(ben)組(zu)成成分,不(bu)僅參與(yu)細(xi)胞的構(gou)建(jian),還(hai)在(zai)生物(wu)體的(de)各(ge)種(zhong)生理過程(cheng)中發(fa)揮(hui)關(guan)鍵作用(yong)。因(yin)此,對(dui)蛋(dan)白(bai)質表達水(shui)平(ping)的定(ding)量分析已(yi)成為現(xian)代(dai)生物(wu)學研(yan)究(jiu)的(de)熱(re)點(dian)之(zhi)壹(yi)。蛋白(bai)質表達定(ding)量分析技術(shu)的發(fa)展(zhan),為(wei)我(wo)們深(shen)入(ru)了解(jie)蛋白(bai)質在(zai)生命活(huo)動中的(de)功能提(ti)供(gong)了強有(you)力的工具。
壹(yi)、分析方法概(gai)述(shu)
蛋(dan)白(bai)質表達定(ding)量分析的(de)方法多(duo)種(zhong)多(duo)樣(yang),主要包括(kuo)基(ji)於(yu)質譜(pu)的(de)定(ding)量方法、基(ji)於(yu)抗體的(de)定(ding)量方法以及基(ji)於(yu)熒光標記(ji)的(de)定(ding)量方法等(deng)。這些方法各(ge)有(you)特(te)點(dian),適(shi)用(yong)於(yu)不同(tong)的(de)研(yan)究(jiu)需求。
1.基(ji)於(yu)質譜(pu)的(de)定(ding)量方法:該(gai)方法利(li)用(yong)質譜(pu)儀對(dui)蛋(dan)白(bai)質進行(xing)精確的質量分析,通(tong)過比(bi)較(jiao)不(bu)同(tong)樣(yang)品(pin)中同(tong)壹(yi)蛋白(bai)質的質量或豐度(du)差(cha)異,實現(xian)蛋(dan)白(bai)質表達水(shui)平(ping)的定(ding)量分析。質譜(pu)法具(ju)有(you)高靈敏度(du)、高分辨率(lv)和高(gao)通量的特(te)點(dian),特(te)別(bie)適(shi)用(yong)於(yu)大規模(mo)蛋白(bai)質組學研(yan)究(jiu)。
2.基(ji)於(yu)抗體的(de)定(ding)量方法:該(gai)方法利(li)用(yong)特(te)異性抗(kang)體與蛋(dan)白(bai)質結(jie)合(he)的(de)特(te)性,通過比(bi)較(jiao)不(bu)同(tong)樣(yang)品(pin)中抗(kang)體與蛋(dan)白(bai)質結(jie)合(he)量的差(cha)異,實現(xian)蛋(dan)白(bai)質表達水(shui)平(ping)的定(ding)量分析。基(ji)於(yu)抗體的(de)定(ding)量方法包括(kuo)Western Blot、ELISA等,這些方法操(cao)作簡便、結(jie)果直(zhi)觀(guan),但(dan)受到抗體特(te)異性、靈(ling)敏度(du)等因(yin)素的影(ying)響(xiang)。
3.基(ji)於(yu)熒光標記(ji)的(de)定(ding)量方法:該(gai)方法通(tong)過在(zai)蛋白(bai)質上標記(ji)熒(ying)光基(ji)團(tuan),利(li)用(yong)熒光(guang)信(xin)號強度(du)與蛋白(bai)質濃度(du)之(zhi)間的線性關(guan)系,實(shi)現(xian)蛋(dan)白(bai)質表達水(shui)平(ping)的定(ding)量分析。基(ji)於(yu)熒光標記(ji)的(de)定(ding)量方法包括(kuo)流式細胞(bao)儀分析、熒(ying)光顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)等(deng),這些方法具(ju)有(you)靈敏度(du)高、實時性(xing)好等(deng)優(you)點(dian)。

二(er)、應(ying)用(yong)
蛋白(bai)質表達定(ding)量分析在(zai)生命科學研(yan)究(jiu)中具(ju)有(you)廣(guang)泛(fan)的應用(yong)價值,涉及疾(ji)病診(zhen)斷(duan)、藥物研(yan)發(fa)、生物(wu)標誌(zhi)物(wu)篩選等(deng)多(duo)個(ge)領(ling)域(yu)。
1.疾(ji)病診(zhen)斷(duan):通過比(bi)較(jiao)正常組(zu)織與(yu)病變組(zu)織中蛋(dan)白(bai)質表達水(shui)平(ping)的差(cha)異,可(ke)以發(fa)現(xian)與(yu)疾(ji)病相(xiang)關(guan)的(de)蛋(dan)白(bai)質標誌(zhi)物(wu),為疾(ji)病的早期診(zhen)斷(duan)和治療提(ti)供(gong)依(yi)據。
2.藥物研(yan)發(fa):它可(ke)以幫助(zhu)研(yan)究(jiu)人(ren)員(yuan)了解(jie)藥物(wu)對(dui)蛋(dan)白(bai)質表達水(shui)平(ping)的影(ying)響(xiang),從而(er)評(ping)估藥(yao)物(wu)的(de)療(liao)效(xiao)和安(an)全性。
3.生物(wu)標誌(zhi)物(wu)篩選:利(li)用(yong)該分(fen)析技術(shu),可(ke)以篩(shai)選(xuan)出與特(te)定(ding)生理或病理過程(cheng)相(xiang)關(guan)的(de)蛋(dan)白(bai)質標誌(zhi)物(wu),為疾(ji)病的預(yu)防、診(zhen)斷(duan)和治療提(ti)供(gong)新(xin)的(de)思(si)路(lu)和方法。
三(san)、展(zhan)望
隨(sui)著(zhe)蛋白(bai)質組學研(yan)究(jiu)的(de)不(bu)斷(duan)深(shen)入(ru)和技術(shu)的不(bu)斷發(fa)展(zhan),蛋(dan)白(bai)質表達定(ding)量分析將(jiang)在(zai)生命科學研(yan)究(jiu)中發(fa)揮(hui)越(yue)來(lai)越(yue)重(zhong)要的作用(yong)。未(wei)來(lai),我(wo)們可(ke)以期(qi)待(dai)更加高(gao)效、精確、高通量的蛋白(bai)質表達定(ding)量分析方法的(de)出(chu)現(xian),為(wei)揭(jie)示生命活(huo)動的奧(ao)秘提供(gong)更(geng)加(jia)有(you)力的支(zhi)持(chi)。同(tong)時(shi),我(wo)們也(ye)需要關註數(shu)據分析方法的(de)發(fa)展(zhan),以更(geng)好(hao)地挖(wa)掘(jue)和利(li)用(yong)蛋白(bai)質表達定(ding)量數(shu)據中的(de)信(xin)息。