服(fu)務(wu)熱(re)線(xian)
86-021-52261560
Product classification
在治療(liao)性(xing)抗體(ti)開(kai)發(fa)中，快(kuai)速(su)識(shi)別具有可(ke)開(kai)發(fa)潛力(li)的候選(xuan)分(fen)子(zi)至關重要(yao)。研(yan)發人(ren)員亟需(xu)高效(xiao)策略(lve)，在早期(qi)階段(duan)即剔除(chu)存在缺陷(xian)的(de)候選(xuan)分(fen)子(zi)，從(cong)而將研(yan)發資源(yuan)集(ji)中(zhong)於(yu)先導(dao)分(fen)子(zi)。
哺乳動(dong)物(wu)細(xi)胞展示（Mammalian Display）是壹種基(ji)於(yu)哺(bu)乳動(dong)物(wu)細(xi)胞表達系(xi)統(tong)的(de)先進(jin)抗體(ti)展(zhan)示(shi)平(ping)臺(tai)，能(neng)夠在更(geng)接(jie)近(jin)體(ti)內生理(li)條件(jian)的(de)環(huan)境中(zhong)高效(xiao)篩選(xuan)出(chu)具有理(li)想抗原親(qin)和力(li)和良好生物(wu)物(wu)理(li)特(te)性(xing)的抗體(ti)分(fen)子(zi)，這些抗體(ti)通(tong)常(chang)表(biao)現出(chu)更(geng)優的可開(kai)發(fa)性(xing)，具有更(geng)強的臨床(chuang)轉化(hua)潛力(li)。要實現這(zhe)壹(yi)技術(shu)優勢(shi)，關(guan)鍵(jian)在(zai)於建(jian)立(li)高效(xiao)的篩選(xuan)流(liu)程(cheng)，在(zai)保持抗體(ti)序(xu)列(lie)多(duo)樣性(xing)和文庫代(dai)表性(xing)的前(qian)提下(xia)，完成(cheng)大(da)規(gui)模(mo)抗體(ti)文庫的(de)篩選(xuan)。
在(zai)本(ben)項初步(bu)研(yan)究中，研(yan)究人(ren)員采(cai)用IgG質粒(li)文庫的(de)壹(yi)部分(fen)進(jin)行轉染(ran)實驗，以(yi)評(ping)估(gu)兩(liang)種電(dian)穿(chuan)孔技術(shu)在(zai)其(qi)哺乳動(dong)物(wu)展(zhan)示工作流程(cheng)中(zhong)的(de)表(biao)現。結(jie)果顯(xian)示，MaxCyte電(dian)穿(chuan)孔技術(shu)在(zai)簡化(hua)實驗流程(cheng)的(de)同(tong)時(shi)，實現了(le)更(geng)優的序列多(duo)樣(yang)性(xing)與文庫覆(fu)蓋度(du)。
01. MaxCyte工作流程(cheng)：
采(cai)用工程(cheng)化(hua)CHO細胞系(xi)（含(han)Flp重組酶介(jie)導(dao)的靶(ba)向(xiang)整(zheng)合(he)位(wei)點），與Flp重組酶表(biao)達(da)質粒(li)及(ji)編碼抗生素抗性(xing)基因(yin)的IgG質粒(li)文庫共(gong)轉(zhuan)染(ran)。電(dian)穿(chuan)孔後細(xi)胞經(jing)短(duan)時(shi)間恢(hui)復培養(yang)，隨(sui)後轉(zhuan)移(yi)至含(han)抗生素的選(xuan)擇(ze)性(xing)培養(yang)基中(zhong)連(lian)續(xu)擴增(zeng)培養(yang)9天。篩選(xuan)結(jie)束(shu)後，收(shou)集(ji)約(yue) 500 萬(wan)細(xi)胞，提取mRNA，進行反(fan)轉錄(lu)並(bing)用於高通量(liang)測(ce)序分(fen)析(xi)。
02. 實驗結果
MaxCyte電(dian)穿(chuan)孔技術(shu)具有良(liang)好的可(ke)擴展(zhan)性(xing)和可重復(fu)性(xing)，能(neng)夠在操(cao)作流(liu)程(cheng)更(geng)簡便、更(geng)快(kuai)速(su)的(de)前(qian)提下(xia)，實現更(geng)優的序列多(duo)樣(yang)性(xing)與更(geng)全面的(de)文庫覆(fu)蓋度(du)。
如(ru)下(xia)圖A所(suo)示，在(zai)所有測(ce)試的(de)細胞數(shu)量(liang)條件(jian)下(xia)，MaxCyte電(dian)穿(chuan)孔所(suo)獲得的(de)序(xu)列(lie)多樣(yang)性(xing)均高於對(dui)照電(dian)穿(chuan)孔方(fang)法。此(ci)外，由(you)於另壹種方(fang)法每(mei)次僅(jin)能(neng)轉(zhuan)染(ran)約(yue)500萬(wan)個(ge)細(xi)胞，因此(ci)每(mei)輪實驗需要進行多批(pi)次(ci)轉染(ran)。相(xiang)比(bi)之下(xia)，MaxCyte電(dian)穿(chuan)孔可(ke)在任(ren)意細胞數(shu)量(liang)下(xia)通過單(dan)次處(chu)理完(wan)成高效(xiao)轉染(ran)，大(da)大(da)簡化(hua)了(le)操(cao)作流(liu)程(cheng)。
為(wei)了(le)進壹(yi)步(bu)評(ping)估(gu)兩(liang)種轉(zhuan)染(ran)方法在文庫代(dai)表性(xing)方面(mian)的差(cha)異，研(yan)究還(hai)進(jin)行(xing)了(le)Jaccard指(zhi)數(shu)和Morisita指(zhi)數(shu)分(fen)析(xi)。作為對(dui)照，將原始質粒(li)文庫轉(zhuan)入大(da)腸桿(gan)菌中擴增(zeng)，隨(sui)後回(hui)收(shou)質粒(li)DNA並(bing)進(jin)行(xing)測(ce)序。
Jaccard 相(xiang)似(si)性(xing)分(fen)析(xi)顯(xian)示（見(jian)下(xia)圖B），在(zai)所有測(ce)試條(tiao)件(jian)下(xia)，MaxCyte電(dian)穿(chuan)孔所(suo)獲得的(de)細(xi)胞群體(ti)與原始質粒(li)文庫之(zhi)間的(de)序列(lie)重疊度顯(xian)著高於另壹種電(dian)穿(chuan)孔方(fang)法。
進壹(yi)步(bu)通過Morisita重疊指(zhi)數(shu)對(dui)兩(liang)種電(dian)穿(chuan)孔方(fang)法在不(bu)同實驗條件(jian)下(xia)的文庫代(dai)表性(xing)進行(xing)了(le)評(ping)估(gu)（見(jian)下(xia)圖C）。結(jie)果顯(xian)示，與原始質粒(li)文庫（淺藍(lan)色方(fang)框）相(xiang)比(bi)，MaxCyte電(dian)穿(chuan)孔所(suo)得樣(yang)本(ben)的Morisita重疊指(zhi)數(shu)普(pu)遍(bian)更(geng)高，表明(ming)其(qi)生成(cheng)的細胞群體(ti)在(zai)表(biao)達(da)IgG序列方面更(geng)接(jie)近(jin)原始文庫。
此(ci)外，比(bi)較同(tong)種方(fang)法在不(bu)同批(pi)次(ci)間轉(zhuan)染(ran)結果的(de)壹(yi)致(zhi)性(xing)（黑色方(fang)框(kuang)），MaxCyte方法的最小重疊指(zhi)數(shu)高達0.96，充分(fen)體(ti)現了(le)MaxCyte電(dian)穿(chuan)孔技術(shu)在(zai)實驗重復(fu)性(xing)和操(cao)作壹(yi)致(zhi)性(xing)方面(mian)的顯(xian)著優勢(shi)。
03. 總(zong)結(jie)：
MaxCyte電(dian)穿(chuan)孔技術(shu)能(neng)夠顯(xian)著提升(sheng)序(xu)列多樣性(xing)和文庫覆(fu)蓋度(du)，其(qi)技術(shu)優勢(shi)包(bao)括(kuo)：
• 簡化(hua)的工作流程(cheng)：單(dan)次電(dian)穿(chuan)孔操(cao)作即可處(chu)理上(shang)億細(xi)胞。
• 可重復(fu)的(de)轉染(ran)效(xiao)果：提(ti)供穩(wen)定壹致(zhi)的結(jie)果。
• 高效(xiao)篩選(xuan)：以(yi)更(geng)少資源和操(cao)作時(shi)間篩選(xuan)出(chu)更(geng)優質的(de)抗體(ti)候選(xuan)分(fen)子(zi)。
MaxCyte Flow Electroporation® 流式(shi)電(dian)轉(zhuan)染(ran)技術(shu)能(neng)夠壹次性(xing)轉染(ran)高達200億細胞，為哺乳動(dong)物(wu)細(xi)胞展示技術(shu)的(de)大(da)規(gui)模(mo)抗體(ti)文庫篩選(xuan)提(ti)供行(xing)業解決(jue)方(fang)案。
* 參考(kao)資(zi)料(liao)：Dyson, M. R., Masters, E., Pazeraitis, D., Perera, R. L., Syrjanen, J. L., Surade, S., … McCafferty, J. (2020). Beyond affinity: selection of antibody variants with optimal biophysical properties and reduced immunogenicity from mammalian display libraries. mAbs, 12(1).
▍關(guan)於MaxCyte：
MaxCyte成立於(yu)1999年(nian)，總部(bu)位於美國(guo)馬(ma)裏蘭(lan)州，是壹家(jia)細胞工程(cheng)電(dian)穿(chuan)孔技術(shu)解(jie)決(jue)方案提供商(shang)。利用其ExPERT™電(dian)轉(zhuan)平臺(tai)，能(neng)夠高效(xiao)、穩(wen)定地實現大(da)規(gui)模(mo)細(xi)胞的工程(cheng)化(hua)處(chu)理，滿(man)足(zu)從(cong)早期(qi)研(yan)究、臨床(chuang)開(kai)發(fa)到(dao)商(shang)業化(hua)生產的全階段(duan)細(xi)胞轉染(ran)需求(qiu)，廣(guang)泛(fan)服(fu)務(wu)於抗體(ti)蛋(dan)白(bai)表達、疫(yi)苗(miao)開(kai)發(fa)、基因編輯(ji)以(yi)及(ji)細胞與基(ji)因治(zhi)療(liao)等(deng)領(ling)域(yu)。作為MaxCyte中(zhong)國(guo)南(nan)區(qu)總(zong)代(dai)，上海(hai)昊擴將(jiang)為您在(zai)研(yan)發、臨床(chuang)到(dao)商(shang)業化(hua)生產的不同階段(duan)，提(ti)供滿(man)足(zu)您細(xi)胞轉染(ran)量(liang)需求(qiu)的專業解決(jue)方(fang)案與技術(shu)支(zhi)持(chi)。
▍關於上(shang)海(hai)昊擴：
上(shang)海(hai)昊擴科學器(qi)材有限(xian)公司(si)成(cheng)立於2019年(nian)，總部(bu)位於上(shang)海(hai)，是壹家(jia)實驗室(shi)設備/耗(hao)材(cai)及(ji)分(fen)析(xi)儀器(qi)的專業服務(wu)商(shang)。公司(si)致(zhi)力(li)於為生物(wu)、醫(yi)藥、物(wu)性(xing)檢測(ce)、化(hua)工分(fen)析(xi)、食品(pin)、工業生產等(deng)相(xiang)關(guan)領(ling)域(yu)客戶提供國(guo)內外高科技專業設備以(yi)及(ji)技術(shu)咨(zi)詢(xun)服務。
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