服(fu)務熱線
86-021-52261560
Product classification
多個(ge)研究(jiu)領域(yu)依賴於稀(xi)有(you)細(xi)胞的(de)分離，例(li)如從(cong)人血(xue)中(zhong)分離循(xun)環(huan)腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞 ( CTCs )、從(cong)母體(ti)樣(yang)本中(zhong)分離胎(tai)兒(er)細胞，或在分離低(di)豐度(du)的(de)GFP陽性(xing)轉(zhuan)染細胞。在(zai)這(zhe)些(xie)情(qing)況下，傳統流式細(xi)胞分選(xuan)儀(yi)的(de)高系統壓(ya)力(li) ( >20psi ) 會對損(sun)害(hai)目標(biao)細(xi)胞的(de)完整(zheng)性(xing)和活性(xing)。高死體(ti)積(ji)會造成樣(yang)本損(sun)失(shi)，稀(xi)有(you)細(xi)胞的(de)數量本身就非(fei)常(chang)有限(xian)，這(zhe)無(wu)疑是雪上(shang)加(jia)霜。此外(wai)，高度(du)專(zhuan)業(ye)化的(de)設備(bei)和技(ji)術(shu)人員(yuan)，增(zeng)加(jia)了操作(zuo)的(de)成本和復(fu)雜(za)性。
單細(xi)胞柔(rou)性(xing)分選(xuan)系統Pala基(ji)於微(wei)流控(kong)技術(shu)，流式細(xi)胞術(shu)和液(ye)滴(di)分配(pei)技(ji)術(shu)。可在(zai)幾分鐘(zhong)內將(jiang)單(dan)個(ge)細(xi)胞分選(xuan)並分離到(dao)96或384孔板(ban)中(zhong)。低(di)系統壓(ya)力(li) (<2psi ) 可確保輕柔(rou)分選(xuan)，並保(bao)持(chi)細(xi)胞活力(li)和(he)完整(zheng)性(xing)。為單細(xi)胞分選(xuan)和(he)分離提(ti)供了快(kuai)速(su)、簡單(dan)的(de)解決(jue)方(fang)案(an)。
01. 實(shi)驗(yan)步驟(zhou)
> 稀(xi)有(you)細(xi)胞富(fu)集
將(jiang)HEK-293細(xi)胞以(yi)0.002%的(de)比(bi)例(li)混(hun)入(ru)到(dao)無(wu)熒(ying)光SP2/0細胞中(zhong) ( 2.8μL HEK-293細(xi)胞加(jia)入到500uL SP2/0中(zhong)) 制備(bei)模擬(ni)稀(xi)有(you)細(xi)胞群(qun)。在(zai)此細胞群(qun)中(zhong)，預(yu)計有10個(ge)FITC信號(hao)值大於100的(de)HEK-293細胞。進(jin)行富(fu)集時，利用(yong)FITC通道(dao)作(zuo)為觸(chu)發器，觸(chu)發值為100。其它(ta)設門(men)參(can)數(shu)參(can)照各(ge)組(zu)的(de)分析(xi)數(shu)據(ju)。
96孔(kong)板(ban)A1孔預(yu)先(xian)加(jia)入150μL培養(yang)基(ji)進(jin)行富(fu)集細(xi)胞收(shou)集。在(zai)富集過(guo)程中(zhong)，將(jiang)1μL的(de)壹(yi)滴(di)液滴(di)到載(zai)玻片(pian)上(shang)，在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下檢測陽(yang)性細(xi)胞的(de)比(bi)例(li)，發現壹(yi)滴(di)中(zhong)總(zong)共含有10個(ge)細(xi)胞，其(qi)中(zhong)壹(yi)個(ge)呈(cheng)GFP陽(yang)性(xing)。將(jiang)富(fu)集後A1孔中(zhong)樣(yang)品(pin) ( 少於200μL ) 轉(zhuan)移至新(xin)芯(xin)片(pian)中(zhong)，用(yong)100μL培養(yang)基(ji)清(qing)洗(xi)兩(liang)遍A1孔，並將(jiang)清(qing)洗(xi)液(ye)同樣(yang)轉(zhuan)移至新(xin)芯(xin)片(pian)中(zhong)。
> 對富集後稀(xi)有(you)細(xi)胞分離
利(li)用(yong)單(dan)細胞分選(xuan)模(mo)式分選(xuan)單(dan)個(ge)熒(ying)光細胞，將(jiang)前向散(san)射(she)光 ( FSC ) 通道(dao)作(zuo)為激(ji)發器，激(ji)發水(shui)平(ping)為FSC50。為排(pai)除(chu)芯(xin)片(pian)之(zhi)間的(de)微(wei)小(xiao)差別(bie)，將(jiang)FITC下限(xian)設(she)為90而(er)不是(shi)之(zhi)前的(de)100，其它(ta)設(she)門(men)數據(ju)參(can)照之(zhi)前的(de)設置。單(dan)個(ge)GFP陽(yang)性(xing)細(xi)胞分布(bu)到(dao)預加(jia)150μL培養(yang)基(ji)的(de)96孔板(ban)中(zhong)。單(dan)個(ge)細(xi)胞利(li)用(yong)顯(xian)微(wei)鏡進(jin)行驗(yan)證，克隆(long)培養(yang)14天。
02. 實(shi)驗(yan)結(jie)果
（1）模擬(ni)稀(xi)有(you)細(xi)胞樣(yang)本包(bao)含500,000個(ge)SP2/0細(xi)胞和(he)僅有10個(ge)GFP陽(yang)性(xing)HEK-293細(xi)胞 ( 0.002% ）。富(fu)集後，目標(biao)群(qun)體(ti)在(zai)分離池(chi)中(zhong)的(de)頻率為10%，增(zeng)加(jia)了5000倍(bei)。
（2）通過(guo)明(ming)場和(he)熒(ying)光顯微(wei)鏡檢查，確認從富集中(zhong)恢復(fu)了(le)7個(ge)GFP陽(yang)性(xing)HEK-293細(xi)胞，富(fu)集效率為70%。
（3）在單(dan)細胞分離後，96孔板(ban)中(zhong)識(shi)別(bie)出(chu)7個(ge)中(zhong)的(de)4個(ge)GFP陽(yang)性(xing)HEK-293細(xi)胞，單(dan)細(xi)胞分離效率為40%。14天的(de)單細(xi)胞擴(kuo)增(zeng)確認了GFP陽性細(xi)胞的(de)克隆(long)增(zeng)殖(zhi)。
03. 單細胞柔(rou)性(xing)分選(xuan)系統Pala的(de)優勢(shi)
（1）溫和(he)的(de)操作(zuo)條(tiao)件(jian)：在(zai)低(di)壓環境下操作(zuo) (＜2psi )，這有(you)助(zhu)於保護細(xi)胞的(de)完整(zheng)性(xing)和活性(xing)，避免因高壓(ya)造成的(de)細胞損(sun)傷(shang)。
（2）靈(ling)活的(de)分離模(mo)式：單(dan)細胞分離模(mo)式，富(fu)集分離模(mo)式，大量細(xi)胞分離模(mo)式，滿(man)足(zu)不同(tong)應(ying)用(yong)需(xu)求。
（3）高效的(de)分離速(su)度(du)：僅需1min即(ji)可完成將(jiang)單(dan)細胞分離至96孔板(ban)中(zhong)，6min可(ke)實(shi)現(xian)分離至384孔板(ban)。
（4）極(ji)低(di)的(de)死體(ti)積(ji)：近乎(hu)零的(de)死體(ti)積(ji)，這有(you)助(zhu)於最大限(xian)度(du)地減(jian)少樣(yang)本損(sun)失(shi)，特(te)別(bie)是(shi)在處(chu)理(li)稀(xi)有(you)或珍貴的(de)細胞樣(yang)本。
（5）適用(yong)於小(xiao)樣(yang)本量：即(ji)使(shi)從(cong)很少的(de)細胞開始(shi) ( 如100個(ge)細(xi)胞 )，單(dan)細(xi)胞分配(pei)器也能(neng)夠(gou)進(jin)行有(you)效的(de)分離和(he)分配(pei)。
總(zong)之(zhi)，單細胞柔(rou)性(xing)分選(xuan)系統Pala的(de)兩步法實(shi)現(xian)稀(xi)有(you)細(xi)胞分離，為傳統(tong)細胞分選(xuan)儀(yi)器提(ti)供了壹(yi)種(zhong)經(jing)濟(ji)高效的(de)替(ti)代(dai)方(fang)案，這種低(di)壓系統保(bao)留(liu)了分離細(xi)胞的(de)完整(zheng)性(xing)和活性(xing)，利(li)於分離的(de)克隆(long)細胞健(jian)壯生(sheng)長(chang)。
* 本文(wen)轉(zhuan)載(zai)自(zi)「ProteinSimple」微(wei)信公(gong)眾號(hao)
關(guan)於ProteinSimple：
美國納(na)斯(si)達(da)克上(shang)市(shi)公(gong)司(si)Bio-techne (Nasdaq: TECH) 集團(tuan)旗下的(de)蛋(dan)白質分析(xi)品(pin)牌(pai)，壹(yi)直致力於研發和生(sheng)產(chan)更精準(zhun)、更快速、更靈(ling)敏(min)的(de)創新(xin)性蛋(dan)白質分析(xi)工(gong)具(ju)，包(bao)括蛋(dan)白質電荷表(biao)征、蛋(dan)白質純度(du)分析(xi)、蛋(dan)白質翻譯(yi)後修飾定量檢測、蛋(dan)白質免疫實(shi)驗(yan)如 Western 和(he) ELISA 定量檢測蛋(dan)白質表(biao)達(da)等技術(shu)，幫助(zhu)生(sheng)物制藥、細(xi)胞治(zhi)療(liao)、生(sheng)物醫學(xue)和生(sheng)命(ming)科(ke)學(xue)等領(ling)域科(ke)學(xue)家解(jie)決(jue)蛋(dan)白質分析(xi)問(wen)題(ti)，深(shen)度(du)解(jie)析(xi)蛋(dan)白質和疾病相互關(guan)系。
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上(shang)海(hai)昊擴科(ke)學(xue)器材有限(xian)公(gong)司(si)成立(li)於2019年，總部(bu)位(wei)於上(shang)海(hai)，是壹(yi)家實(shi)驗(yan)室設(she)備(bei)/耗(hao)材及分析(xi)儀(yi)器的(de)專(zhuan)業(ye)服(fu)務商(shang)。公(gong)司(si)致力於為生(sheng)物、醫藥、物性檢測、化工(gong)分析(xi)、食(shi)品、工(gong)業(ye)生(sheng)產(chan)等相關(guan)領(ling)域(yu)客(ke)戶提(ti)供國內外(wai)高科(ke)技(ji)專(zhuan)業(ye)設(she)備(bei)以(yi)及(ji)技(ji)術(shu)咨(zi)詢(xun)服(fu)務。2024年，上(shang)海(hai)昊擴已正(zheng)式與(yu)美(mei)國Bio-techne集團(tuan)旗下的(de)蛋(dan)白質分析(xi)品(pin)牌(pai)ProteinSimple達(da)成合作，成為其華東(dong)大區授權代(dai)理(li)商(shang)。
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